桑枝提取物主要成分及其调节有机离子转运改善高尿酸血症机理研究

【摘要】痛风是一组嘌呤代谢紊乱的慢性终身罹患性疾病。高尿酸血症是痛风的主要病理特征,尿酸生成增多或排泄减少均可导致血清尿酸水平的升高。鉴于其高发率、复发率和危害性日趋严重,大力加强高尿酸血症和痛风研究和防治具有重要理论和临床意义。桑枝(RamulusMori)为桑科植物MorusalbaL的干燥嫩枝,具有祛风湿、利关节等作用,在临床上常用于治疗关节肿痛、手足麻木、风湿痹痛等与痛风有关的多种疾病。国内外对桑枝化学成分和药理作用研究较多,但在桑枝提取物及其主要化学成分治疗高尿酸血症研究方面少见有报道。本论文以桑枝提取物为研究对象,在高尿酸血症动物模型上评价其降尿酸作用及机制,并通过系统的提取分离,以期获得桑枝提取物的主要化学成分。在此基础上研究主要成分降尿酸作用及其机理,为中药桑枝的临床应用提供新的科学依据。一、在尿酸酶抑制剂氧嗪酸钾盐所致的小鼠高尿酸血症模型上,证实了桑枝提取物具有明显降低小鼠血清和肝脏尿酸水平的作用。发现桑枝提取物可抑制高尿酸血症小鼠肝脏黄嘌呤氧化酶(XOD)活性、mRNA与蛋白表达,并降低肾脏特异性尿酸转运子mURAT1的mRNA与蛋白表达。表明桑枝提取物可通过抑制肝脏尿酸生成和促进肾脏尿酸排泄等作用,以降低高尿酸血症小鼠血清尿酸水平。二、利用溶剂分步萃取法和各种色谱手段(硅胶吸附柱色谱、分配柱色谱、大孔树脂柱色谱、Sephadex-LH20柱色谱、反相C18柱色谱、制备薄层等),分离得到26个化合物,根据波谱数据分析(1D-NMR、2D-NMR、MS等)鉴定了其中20个化合物,这些化合物分属于二苯乙烯类、黄酮类、甾醇类和酚类。已鉴定出的20个化合物包括2个二苯乙烯类化合物分别为桑皮苷(MulberrosideA)和氧化白藜芦醇(Oxyresveratrol);14个黄酮类化合物分别为槲皮素(Quercetin)、山柰酚(Kaempferol)、木犀草素(Luteolin)、柘树黄酮(CudraflavoneC)、草大戟素(Steppogenin)、去甲木菠萝黄酮(Norartocarpetin)、MorachalconeA、紫铆查尔酮(Butein)、异槲皮苷(Isoquercetin)、金丝桃苷(Hyperin)、槲皮素-3-O-β-D-甘露糖(Quercetin-3-O-β-D-mannanpyranoside)、RubraflavoneA、山奈酚-3-β-D-葡萄糖(Kaempferol3-βD-glucoside)、柚皮素(Naringenine);2个酚类化合物分别为反式对羟基肉桂酸(trans-4-Hydroxycinnamicacid)和桑辛素M(MoracinM)及2个甾醇类β-谷甾醇(β-Sidosterol)和胡萝卜苷(Daucosterol)。三、分析这20个化合物结构特点,结合课题组已有工作,选择主要化学成分桑皮苷进行了降尿酸作用及其机理研究。在尿酸酶抑制剂氧嗪酸钾盐所致的小鼠高尿酸血症模型上,发现桑皮苷显著降低血清和肝脏尿酸水平、升高尿液尿酸水平和尿酸排泄分数,表明桑皮苷促进高尿酸血症小鼠肾脏尿酸排泄。采用RT-PCR和Westenblotting方法分析桑皮苷对高尿酸血症小鼠肾脏与尿酸转运有关的有机阴离子转运子的影响。发现桑皮苷可显著下调小鼠肾脏尿酸盐转运子1(mURAT1)和葡萄糖转运子9(mGLUT9)的mRNA与蛋白表达,上调小鼠肾脏有机阴离子转运子1(mOAT1)的mRNA与蛋白表达,表明桑皮苷可抑制高尿酸血症小鼠肾脏尿酸重吸收和促进尿酸分泌,从而提高尿酸排泄以降低血清尿酸水平。再者,本论文发现桑皮苷可上调高尿酸血症小鼠肾脏有机阳离子转运子1(mOCT1)和有机阳离子转运子2(mOCT2)的mRNA与蛋白表达,并伴随血清肌酐水平的降低和尿液肌酐水平的升高,表明桑皮苷对高尿酸血症小鼠肾脏具有保护作用。综上所述,桑枝提取物具有降尿酸作用,该提取物含有二苯乙烯类、黄酮类、酚类和甾醇类等二十多种化合物,其中桑皮苷是桑枝提取物的主要化学成分。发现桑皮苷可通过调节与尿酸转运有关的有机阴离子表达以降低肾脏尿酸重吸收和促进尿酸分泌,从而提高肾脏尿酸排泄能力以改善高尿酸血症小鼠尿酸盐失衡状态。另外,桑皮苷可提高肾脏有机阳离子表达具有肾保护作用。这些研究结果为桑枝临床治疗高尿酸血症和痛风提供了新的科学依据。
【作者】王彩萍；
【导师】孔令东；
【作者基本信息】南京大学，生物学，2010，博士
【关键词】桑枝；桑皮苷；高尿酸血症；痛风；血清尿酸；有机阴离子转运子；尿酸重吸收；尿酸分泌；尿酸排泄；黄嘌呤氧化酶；肾保护；有机阳离子转运子；

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